Mechanische Bürsten-Katheterabrasionsmethode zur Gewinnung und Kultivierung humaner
Gefäßendothelzellen:
Erste in vitro Ergebnisse

Zusammenfassung.

Ziel: Überprüfung der Wertigkeit der Nylon-Bürste eines Cragg-Thrombolyse-Kathetersystems zur Isolierung humaner vitaler Gefäßendothelzellen der Nabelschnurvene (HUVEC) zur Kultivierung venöser Endothelzellen. Methoden: Es wurden frische, d. h. maximal 6 - 8 h nach Entbindung, Nabelschnüre gesammelt und in sterilen Behältern bis zur Aufarbeitung aufbewahrt. In das Lumen der Nabelschnurvene konnte ein 6-French-Bürstenkatheter eingeführt und unter handmechanischen Rotationen zurückgezogen werden. Die Nylon-Bürste wurde intermittierend in Zellmedium mit Serumzusatz unter Verwendung des Kathetermotors ausgeschüttelt. Nach mehrmaligem Wiederholen des Vorganges wurden die Endothelzellen zentrifugiert und suspendiert. Die Zellsuspension wurde anschließend bezüglich Zellzahl und Vitalität untersucht. Ergebnisse: Die vom Alter der Nabelschnur abhängige Vitalität der Endothelzellen war innerhalb der ersten drei Stunden am größten und betrug 29,8 ± 11,4 %. In einer Bürstenabrasion von 3,32 × 10⁵ ± 52016 vitalen Zellen pro ca. 10 cm-Venensegment konnten Zellkulturen unterschiedlicher Zelldichte angelegt werden, die nach max. 2 - 3 Wochen konfluent waren. Schlussfolgerung: Die Katheterbürstenabrasionsmethode ist effektiv für eine Gewinnung humaner vitaler Gefäßendothelzellen in vitro.

Mechanical brush-catheter abrasion method for the isolation and culture of human umbilical vein endothelial cells. First in vitro results.

Purpose: To determine the value of a nylon brush (Cragg thrombolytic catheter system) with regard to the isolation and culture of viable human vascular umbilical vein endothelial cells (HUVEC). Material and Methods: Fresh human umbilical cords were collected after a maximum of 6 - 8 h post delivery. They were stored in sterile tubes till further preparation. After predilation the umbilical cord veins, a 6 French brush catheter was inserted, expanded, and removed by hand using rotating movements. The nylon brush was shaken out in cell medium containing serum proteins by a connected motor drive. After repeating these procedures, the detached endothelial cells were centrifugated and resuspended. The cell numbers were assessed and cell viability controlled. Results: The endothelial cell (EC) viability depended on the umbilical cord's age and was the highest (29.8 ± 11.4 %) within 3 h after delivery. The brush abrasion (3.32 × 10⁵ ± 52016 viable EC/10 cm vein segment) enabled us to culture these cells under different cell concentrations. They grew to confluence after 2 - 3 weeks. Conclusions: The brush-catheter abrasion is an effective method for collecting viable human endothelial cells in vitro.

Schlüsselwörter:

Katheter - Abrasion - Endothelzellen - Isolierung - Kultivierung

Key words:

Catheter - Abrasion - Endothelial cells - Isolation - Culture

Literatur

• 1 Jaffe E A, Nachman R L, Becker C G, Minick C R. Culture of human endothelial cells derived from umbilical veins.  J Clin Invest. 1973;  52 2745-2756
• 2 Gimbrone M A, Cotran R S, Folkman J. Human vascular endothelial cells in culture.  J Cell Biol. 1974;  60 673-684
• 3 Dunzendorfer S, Bellmann R, Wiedermann C J. A simple way to obtain sufficient amounts of arteriel endothelial cells from human umbilical cords.  Cell Biol Int. 1999;  23 (1) 89-90
• 4 Davison P M, Bensch K, Karasek M A. Isolation and growth of endothelial cells from the microvessels of the newborn human foreskin in cell culture.  J Clin Invest. 1980;  75 316-321
• 5 Sipehia R, Martucci G, Lipscombe J. Transplantation of human endothelial cell monolayer on artificial vascular prosthesis: the effect of growth-support surface chemistry, cell seeding density, ECM protein coating, and growth factors.  Artif Cells Blood Substit Immobil Biotechnol. 1996;  24 (1) 51-63
• 6 Feng L, Stern D M, Spellman J P. Human endothelium: endovascular biopsy and molecular analysis.  Radiology. 1999;  212 655-664
• 7 Lindl T, Bauer J (eds). Zell- und Gewebekultur. Stuttgart; Fischer 1989: 29-169
• 8 Deutsch M, Meinhart J, Fischlein T, Preiss P, Zilla P. Clinical autologous in vitro endothelialization of infrainguinal ePTFE grafts in 100 patients: a 9-year experience.  Surgery. 1999;  126 847-855
• 9 Scott N A, Candal F J, Robinson K A, Ades E W. Seeding of intracoronary stents with immortalized human microvascular endothelial cells.  Am Heart J. 1995;  129 860-866
• 10 Moussy F, Neumann A W, Zingg W. The force of detachment of endothelial cells from different solid surfaces.  ASAIO Trans. 1990;  36 (3) 568-572