Ein Vergleich von vier Immunoblot-Systemen zur Differenzierung von Antikörpern gegen nukleäre und zytoplasmatische Antigene

Abstract

Since recently, immunoblots for detection and differentiation of antibodies against nuclear antigens (ENA), other nuclear antigens and cytoplasmic antigens, blotted on nitrocellulose strips (Western blot technique) became commercially available. The aim of our analysis was to compare the specifity and sensitivity of four different immunblot systems (blots A, B, L, V). We examined 20 sera of patients with various clinically confirmed connective tissue diseases. The sera contained a total of 32 different antigens. The antibodies in the sera were defined by double immunodiffusion (Ouchterlony) test, immunofluorescence (HEp2 cells) and by comparison with WHO reference sera.

Results: Blot a detected 81 %, blot B 30 %, blot L 57 % and blot V 58 % of the auto-antibodies in the tested sera. In addition, we analysed the number of false positive bands. Blot A detected one, blot B 15, blot L none and blot V 10 false positive auto-antibodies.

As sensitivity and specifity differ between the various blot systems, each clinical laboratory should first test the commercially available blot systems under daily conditions with standard sera. In comparison of four different blot systems, blot A was superior to the others with regard to sensitivity, specificity, quality and laboratory handling.

Zusammenfassung

Seit einiger Zeit sind verschiedene Immunoblots zum Nachweis und zur Differenzierung von Antikörpern gegen extrahierbare nukleäre Antigene (ENA) und andere nukleäre oder zytoplasmatische Antigene erhältlich. Der Nachweis dieser Autoantikörper erfolgt hierbei mit Western-blot-Technik auf vorgefertigten Nitrozellulosestreifen. Ziel dieser Untersuchung war der Vergleich der Sensitivität und Spezifität von vier kommerziell erhältlichen Immunoblotsystemen (Blot A, B, L, V). Dazu wurden 20 Seren mit insgesamt 32 Autoantikörpern von Patienten mit verschiedenen, klinisch klassifizierten Kollagenosen untersucht. Die Autoantikörperzusammensetzung der einzelnen Seren wurde vorher mittels Doppelimmundiffusion nach Ouchterlony, Immunfluoreszenz auf HEp2-Zellen und Vergleich mit WHO-Kontrollseren festgelegt.

Ergebnis: Von Blot A wurden 81%, von Blot B 30%, von Blot L 57% und von Blot V 58% der Antikörper richtig erkannt. Falsch-positiv wurden von Blot A eine, von Blot B 15, von Blot L keine und von Blot V zehn Banden zugeordnet.

Da die Sensitivität und Spezifität der einzelnen Produkte stark variieren, sollte jedes Labor die angebotenen Systeme zuerst unter Routinebedingungen mit Referenzseren testen, um Fehlaussagen so sicher wie möglich zu vermeiden. Beim Vergleich der vier verschiedenen Systeme war Blot A den anderen hinsichtlich Sensitivität, Spezifität, Korrelation mit der klinischen Diagnose und Handhabung im Labor überlegen.