Untersuchung der Rolle von c-jun im CD95 Signalweg

Hintergrund: c-jun ist ein Mitglied der AP–1 Transkriptionsfaktorfamilie und wurde als Protoonkogen beschrieben. Bisherige Arbeiten konnten zeigen, das c-jun in vielen verschiedenen zellulären Funktionen wie Proliferation, Diffenenzierung, Transformation und Apoptose involviert ist. Die Funktion von c-jun ist abhängig von der zellulären Differenzierung und vom Zelltyp. Der Mechanismus jedoch, über den c-jun zur Karzinognese beiträgt, ist noch zu klären.

Ziel und Methoden: In dieser Arbeit haben wir die Rolle von c-jun in der Karzinogenese und seine Rolle in Bezug auf Apoptose über den CD95 vermittelten Signalweg untersucht. Dazu wurde die Apoptoserate in den Hepatomzelllinien HepG2 und Hep3B nach Inhibierung von c-jun und nachträglicher Inkubation mit verschiedenen Apoptose auslösenden Substanzen, gemessen. Zwei verschiedene siRNAs wurden benutzt, um den c-jun Expressionslevel der Zellen herabzuregulieren.

Ergebnisse: Wir konnten zeigen, dass eine siRNA-Transfektion zur erfolgreichen Herabregulation des c-Jun Transkriptionsfaktors sowohl auf RNA- als auch auf Proteinebene, führt. Dieser Effekt konnte, wie eine kinetische Analyse zeigte, über fünf Tage beobachtet werden. Die funktionale Suppression von c-jun konnte mit Hilfe eines Luciferase-Reportergenassays bestätigt werden. Durchflusszytometrische Analyse zeigten eine signifikante Erhöhung der Apoptoserate nach siRNA-Transfektion. Darüberhinaus führte eine Herrunterregulation von c-jun und eine anschliessende Stimmulation mit CD95L und TRAIL verglichen mit Kontrollen zu einer weiteren Steigerung der Apoptoserate auf bis zu 60%. Weiterhin konnte gezeigt werden, dass nach Suppression der c-jun-Expression und anschliessender Stimulation mit 5-Fluorouracil nicht aber mit Etoposid oder Tumornekrosefaktor alpha die Apoptoserate deutlich gesteigert werden konnte.

Zusammenfassung: c-jun unterdrückt Apoptose in Hepatomzellen. Durch Suppression von c-jun kann die CD95-, TRAIL- und 5-Fluorouracil-induzierte Apoptose verstärkt werden. Diese Daten sprechen für eine kritische Funktion des c-jun in der hepatozellulären Karzinogenese. Die Ausschaltung von c-jun scheint daher ein vielversprechendes Target in der Therapie des hepatozellulären Karzinoms zu sein.