Induktion des Membranständigen LPS-Rezeptors CD14/Toll-Like-Rezeptor 4 in Hepatozyten der Maus durch proinflammatorische Cytokine

Einleitung. Lipopolysaccharide (LPS) gehören zu den wichtigsten Entzündungsauslösern im Säugerorganismus. Eigene Vorarbeiten haben gezeigt, dass Hepatozyten der Maus den LPS-Rezeptor-Komplex aus membranständigem CD14 (mCD14) und Toll-like-Rezeptor 4 (TLR4) nicht exprimieren und dementsprechend auch nicht direkt durch LPS stimulierbar sind. Durch IL-6 oder IL-1β sind in Ratten-Hepatozyten Rezeptoren für Anaphylatoxin C5a als Endprodukt der durch LPS ausgelösten Komplementaktivierung de novo induzierbar. Es sollte daher untersucht werden, ob auch mCD14/TLR4 in Hepatozyten induzierbar ist und ob dieser Rezeptor-Komplex funktionell aktiv ist. Methodik. Hepatozyten wurden aus Mäuselebern isoliert, mit IL-6, IL-1β oder TNFα stimuliert und die Expression von CD14-und TLR4-mRNA durch quantitative Real-Time-PCR, von CD14- und TLR4-Protein durch Western-Blots von Triton X114-Lysaten analysiert. Zur Überprüfung der Funktionalität der de novo exprimierten Rezeptoren wurden mit IL-1β vorstimulierte Hepatozyten mit LPS inkubiert und die α₂-Macroglobulin-Synthese mittels Northern- und Western-Blot analysiert. Ergebnisse. Hepatozyten exprimierten konstitutiv geringe Mengen an CD14-mRNA aber kein mCD14-Protein und keine TLR4-mRNA. Die Stimulation mit proinflammatorischen Cyto? kinen verstärkte die Expression von CD14-mRNA und induzierte die Expression von TLR-4-mRNA und von mCD14-Protein in der Membran. Alle 3 Parameter wurden durch IL-1β am stärksten, durch IL-6 etwas weniger und durch TNFα am wenigsten stark beeinflusst. In mit IL-1β vorstimulierten Hepatozyten induzierte LPS – anders als in unbehandelten Hepatozyten – die mRNA- und Protein-Expression des Typ-2-Akut-Phase-Proteins α₂-Macroglobulin. Schlussfolgerung: Durch Stimulation mit proinflammatorischen Cytokinen wird die Expression des LPS-Rezeptor-Komplexes aus mCD14 und TLR4 in Hepatozyten der Maus induziert. Durch diese Behandlung erlangen die Zellen eine direkte Reaktivität für LPS.