Geburtshilfe Frauenheilkd 2003; 63 - F-O 05
DOI: 10.1055/s-2003-815220

Coxsackie-Adenovirus-Rezeptor (CAR) ist ein Zell-Adhäsionsprotein bei Ovarial- und Zervixkarzinomzellen moduliert durch Dexamethason, TNF alpha und TGF beta

IB Runnebaum 1, A Brüning 1
  • 1Universitätsfrauenklinik Freiburg, Deutschland

Zielsetzung: CAR hat eine Schlüsselrolle für den Eintritt von adenoviralen Vektoren in die Zelle. Für die klinische Gentherapie suchen wir nach Möglichkeiten, die adenovirale Gentransfereffizienz zu verbessern. Faktoren mit Einfluss auf die CAR-Expression und die funktionelle Rolle von CAR sind unbekannt und sollten bei Ovarial- und Zervixkarzinomzellen untersucht werden.

Materialien und Methoden: Zellkultur von Ovarial- und Zervixkarzinomzellen, konfokale Mikroskopie und adenoviraler Transfer des Markergens Beta-Galactosidase und p53 (AdGal) sowie CAR- und Integrin-Nachweis mittels RT-PCR und FACScan. Klonierung des CAR-Gens.

Ergebnisse: Die Dexamethason-Behandlung, wie wir sie in der klinischen Gentherapie angewandt haben, resultierte in einer deutlich geringeren Effizienz des adenoviralen Gentransfers. Die Expression von CAR und Integrin alpha5beta1 wurde durch Dexamethason transkriptionell reduziert. TNF alpha erhöhte signifikant die Expression von CAR sowie die der adenovirusbindenden Integrine alpha5beta1, alphaVbeta3 and alphaVbeta5. Die Vorbehandlung mit TNF alpha erhöhte den AdGal Gentransfer in Karzinomzellen und erhöhte den zytotoxischen Effekt des p53-exprimierenden Adenovirus. Dagegen reduzierte TGF beta die CAR-Expression und den adenoviralen Gentransfer. Die konfokale Immunfluoreszenz zeigte eine Lokalisation von CAR an Zell-Zell-Adhäsionen. Die Auflösung der Zell-Zell-Kontakte führte zur Erhöhung der adenoviralen Gentransfereffizienz. Aus Zellen ohne endogene CAR-Expression wurden Klone mit stabiler CAR-Expression hergestellt. Diese Zellen konnten erst durch CAR Zell-Zell-Kontakte herstellen und zeigten eine reduzierte adenovirale Gentransfereffizienz.

Zusammenfassung: In der klinischen Gentherapie kann die adenovirale Gentransfereffizienz signifikant durch Zelladhäsion, TNF alpha, TGF beta und Dexamethason beeinflusst werden. (Förderung DFG Ru 476/5)