CD38 spezifische Nanobodies für die in vivo Bildgebung von Lymphomen

Zielsetzung:

CD38 ist ein transmembranes Ektoenzym exprimiert auf Plasmazellen und über exprimiert auf hämatopoetischen Tumoren wie z.B. dem Multiplen Myelom und Burkitt Lymphom. CD38 repräsentiert somit ein vielversprechendes Zielmolekül für die molekulare Bildgebung von hämatopoetischen Tumoren. Das Ziel unserer Studie ist es CD38-spezifische Einzeldomänenantikörper (Nanobodies), gewonnen aus Schwere-Ketten-Antikörpern von Lamas, für die in vivo Bildgebung von hämatopoetischen Tumoren zu entwickeln.

Material und Methodik:

Wir haben mehrere CD38-spezifsche Nanobodies aus immunisierten Lamas gewonnen. Die Bindungsspezifität, Affinität und Epitopkartierung wurden in vitro mittels Durchflusszytometrie analysiert. Ausgewählte Nanobodies wurden aufgereinigt und an AF680 konjugiert. Qualitätskontrollen erfolgten mittels SDS-Page, Coomassie Färbung und Fluoreszenzimaging der Gele. Für die in vivo Bildgebung von CD38 positiven und negativen Tumoren im Mausmodell, wurden mit Luziferase transduzierte, menschliche und murine Tumorzellen s.c. injiziert. Fluorophore-konjugierte Nanobodies wurden nach Detektion von subkutanen Tumoren intravenös injiziert. Die Bildgebung erfolgte vía Biolumineszenz und Nah-Infrarot-Fluoreszenzoptischer (NIRF) Bildgebung. Ex vivo Analysen entnommener Tumor erfolgte mittels Mikroskopie und Durchflusszytometrie.

Ergebnisse:

Wir konnten 22 Nanobody-Familien selektieren, die 3 unterschiedliche Epitope auf CD38 erkennen. CD38 positive Tumoren konnten in vivo mit hoher Spezifität nach intravenöser Injektion mittels Fluorophor konjugierter Nanobodies detektiert werden.

Schlussfolgerungen:

Unsere CD38 spezifischen Nanobodies erscheinen als vielversprechendes Werkzeug für die Charakterisierung und Detektion von CD38 überexprimierenden hämatopoetischen Tumoren in vitro und in vivo.