Antitumorale Effekte einer Kombination aus Ad-flk1 vermittelter Anti-Angiogenese mit einer AFP-Vakzinierung in einem orthotopen murinen HCC Modell

Einleitung: Immuntherapeutische Ansätze mit Alpha-Fetoprotein (AFP) gepulsten Dendritischen Zellen (DC) wurden beim hepatozellulären Karzinom (HCC) in ersten klinischen Studien bereits erprobt, allerdings zeigten diese bislang kein relevantes Ansprechen. Das HCC ist durch eine ausgeprägte Neoangiogenese charakterisiert. Neue angiostatisch wirkende Ansätze, wie das lösliche VEGFR2 (vessel endothelial growth factor receptor 2), auch flk1 genannt, haben einen antitumoralen Effekt gegen das HCC in vivo gezeigt. In dieser Arbeit war unser Ziel zu untersuchen, ob sich durch die Kombination aus einer Vakzinierung mit AFP-gepulsten DC mit flk1-exprimierenden adenoviralen Vektoren (Ad-flk1) die antitumoralen Effekte beider Ansätze gegen das HCC in vivo steigern lässt.

Methodik: 10⁵ syngene AFP positive Hepa129 Zellen wurden zur Induktion orthotoper HCC in den linken Leberlappen von C3H-Mäusen injiziert. 3 Tage später wurde Ad-flk1 in einer Konzentration von 10⁹ pfu bzw. AdLacZ als Kontrolle intravenös (i.v.) appliziert. Das Überleben der Tiere sowie die Bildung von malignem Aszites wurden beobachtet. In einem zweiten Versuch wurde dieser Ansatz mit einer subkutanen (s.c.) Vakzinierung AFP-gepulster DC kombiniert. Diese wurden zuvor aus dem Knochenmark von C3H-Mäusen gewonnen und mit Ad-AFP transduziert.

Ergebnisse: Die alleinige i.v. Injektion von Ad-flk1 zeigte einen signifikanten antitumoralen Effekt gegen orthotope HCC. Ad-flk1 führte zu einer signifikanten Reduktion der Aszitesbildung sowie zur Verlängerung des Überlebens der Tiere im Vergleich zu den AdLacZ behandelten bzw. Kontrolltieren (p<0,05). An Tag 22 nach Tumorinduktion waren 67% der AdLacZ-Tiere bereits gestorben, wohingegen 100% der Ad-flk1-behandelten Tiere lebten. Durch die Kombination mit einer AFP-DC-Immunisierung verlängerte sich das Überleben der Tiere noch weiter. 14,3% der Tiere überlebten 32 Tage, während alle Kontrollen bereits gestorben waren.

Diskussion: Unsere Daten zeigen, dass die angiostatisch wirkende i.v. Applikation von Ad-flk1 zu einer Verlängerung im Überleben HCC-tragender Mäuse führt. In Kombination mit einer AFP-DC-Immunisierung konnte dieser Effekt nochmals deutlich gesteigert werden. Im etablierten orthotopen HCC-Modell konnte somit ein synergistischer Effekt der Kombination nachgewiesen werden.