Summary
A new medium (pH 5.6 reached by addition of 0.1 mol/l acetate buffer, 37 °C, 60 min) was established for detecting anti-free radical compounds in the 1,1-di-phenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) assay. DPPH bleaching activities of typical anti-oxidants appeared generally weaker at pH 8.0 (the measured ethanol solution pH by the classical DPPH assay method) than at pH 5.6.
Nilvadipine (CAS 75530-68-6), a lipo-philic calcium antagonist, enhanced the bleaching much more at pH 5.6 than at pH 8.0. Nifedipine (CAS 21829-25-4) and amlodipine (amlodipine besilate, CAS 88150-42-9) showed some effect, but the other five calcium antagonists failed to bleach DPPH at any pH tested (pH 4.4-8.0). Probucol and β-carotene (standard antioxidant) showed nearly the same bleaching activity as nilvadipine. Captop-ril, glutathione and bilirubin were weaker anti-free radical compounds at pH 5.6. No intermediating participation of superoxide radicals and hydroxyl radicals were observed in the DPPH assay, both at pH 8.0 and 5.6. Thus, nilvadipine was shown to be an efficient free-radical scavenger only at around pH 5.6, a weak acidic condition which may occur as a result of inflammation and/or ischemia-re-perfusion.
Zusammenfassung
Wirkung von Nilvadipin im 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl-(DPPH-)Assay in schwach saurem Medium
Für die Untersuchung der Radikalfänger-Eigenschaften von Substanzen im 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl-(DPPH-)As-say wurde ein neues Medium (pH 5,6 durch Zugabe von 0,1 mol Acetat-Puffer, 37 °C, 60 min) geschaffen. Die DPPH-auf-hellende Aktivität von typischen Antioxi-dantien war bei pH 8,0 (nach klassischer DPPH-Assay-Methode gemessener pH der Ethanol-Lösung) allgemein schwächer als bei pH 5,6.
Nilvadipin (CAS 75530-68-6), ein lipo-philer Kalzium-Antagonist, führte bei pH 5,6 zu einer wesentlich stärkeren Aufhellung als bei pH 8,0. Nifedipin (CAS 21829-25-4) und Amlodipin (Amlodipin-besilat, CAS 88150-42-9) zeigten eine leichte Wirkung, während 5 weitere Kal-zium-Antagonisten bei keinem der getesteten pH-Werte (pH 4,4-8,0) zu einer Aufhellung von DPPH führten. Probucol und β-Carotin (Standard-Antioxidans) zeigten nahezu die gleiche aufhellende Wirkung wie Nilvadipin. Captopril, Gluta-thion und Bilirubin waren bei pH 5,6 weniger starke Radikalfänger. Weder bei pH 8,0 noch bei pH 5,6 beeinflußten Superoxid- und Hydroxyl-Radikale per se den DPPH-Test. Damit hat sich gezeigt, daß Nilvadipin nur bei einem pH von ca. 5,6-also in schwach saurer Umgebung, wie sie durch Entzündung und/oder Isch-ämie-Reperfusion entstehen kann - ein wirksamer Radikalfänger ist.
Key words
Amlodipine - CAS 21829-25-4 - CAS 75530-68-6 - CAS 88150-42-9 - 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) assay, weak acidic medium - Nifedipine - Nilvadipine
