A Non-extracting Procedure for the Determination of Meloxicam in Plasma Samples by HPLC-Diode Array Detection

Summary

The bioequivalence of two formulations of 15 mg tablets of meloxicam (CAS 71125-38-7), Meloxicam (LaborMed Pharma) and a commercially available preparation as reference in 24 healthy male and female Caucasian volunteers was assessed based on a validated non-extractive HPLC-DAD method. The sample preparation procedure was based on protein precipitation with a mixture of methanol/acetonitrile, trifluoacetic acid and sodium sulfate solution. Piroxicam (CAS 36322-90-4) was used as internal standard. The stepwise gradient elution profile of the chromatographic method allows injection of a high volume of the sample (500 µL) with the focusing of both analytes in a Chromolith Performance RP-18e column. The mobile phase constituents are methanol and aqueous 20 mmol/L Na₂HPO₄ buffer solution brought to pH = 6 with H3PO4. A flow-rate of 2 mL/min achieves a complete chromatographic run (including column equilibration) within 12 min. UV detection at 356 nm allowed a quantitation limit around 30 ng/mL. Bioequivalence study was based on an open-label, randomized, two-period, two-sequence, single dose, crossover design with a 2-week wash-out period between consecutive oral administrations. The main pharmacokinetic parameters (C_max, t_max, t1/2, AUD and AUC_0–0) were considered as evaluation criteria for the bioequivalence of the test drug against the reference.

Zusammenfassung

Ein nichtextraktives Verfahren zur Bestimmung von Meloxicam in Plasma mittels HPLC-Diode Array Detection

Die Bioäquivalenz zweier Formulierungen von 15 mg-Tabletten Meloxicam (CAS 71125-38-7), Meloxicam (LaborMed Pharma) und einem handelsüblichen Präparat als Referenzsubstanz, wurde bei 24 gesunden männlichen und weiblichen kaukasischen Probanden mit einer validierten nichtextraktiven HPLC-DAD-Methode ermittelt. Zur Probenvorbereitung wurde eine Proteinfällung mit einem Gemisch von Methanol/Acetonitril, Trifluoressigsäure und Natriumsulfat-Lösung eingesetzt. Piroxicam (CAS 36322-90-4) diente als interner Standard. Das schrittweise Gradientenelutionsprofil des chromatographischen Verfahrens gestattet ein hochvolumiges Probenvolumen (500 µL) mit Fokussierung beider Analyte auf einer Chromolith Performance RP-18e-Säule. Die mobile Phase besteht aus Methanol und wäßrigem 20 mol/L Na₂HPO₄-Puffer, der mit H₃PO₄ auf pH 6 gestellt wurde. Eine Flußrate von 2 mL/ min gestattet einen vollständigen chromatographischen Lauf (einschlieβlich Säulenequilibrierung) innerhalb 12 min. Mit einer UV-Detektion bei 256 nm konnte eine Bestimmungsgrenze um 30 ng/mL erzielt werden. Die Bioäquivalenzstudie beruht auf einem offenen randomisierten zweiperiodigen und bisequentiellen Einzeldosis-Crossover-Design mit einer zweiwöchigen Auswaschphase zwischen den einzelnen oralen Verabreichungen. Dabei wurden die hauptsächlichen phrmakokinetischen Parameter (C_max, t_max, t_1/2, AUD und AUC_0–0) als Evaluationskriterien für die Bioäquivalenz der Testsubstanz gegenüber der Referenz herangezogen.

Key words

Anti-inflammatory drugs, non-steroidal - CAS 36322-90-4 - CAS 71125-38-7 - Meloxicam, bioequivalence study, detection in plasma, non-extractive HPLC-DAD method - Piroxicam