Z Gastroenterol 2011; 49 - P010
DOI: 10.1055/s-0031-1285282

Phosphorylierung des Epidermalen Wachstumsfaktor Rezeptors während Helicobacter pylori Infektion führt zu einer gesteigerten Expression von iNOS und erhöhten Produktion von NO in Makrophagen

S Hoge 1, 2, R Chaturvedi 1, 3, F Yan 4, F Meyer 2, MR Frey 5, M Asim 1, 3, DP Barry 1, 3, K Singh 1, ND Lewis 1, 6, T de Sablet 1, 3, AP Gobert 1, 3, 7, DB Polk 5, KT Wilson 1, 3, 6
  • 1Vanderbilt University Medical Center, Division of Gastroenterology, Hepatology, and Nutrition, Department of Medicine, Nashville, United States
  • 2Otto-von-Guericke Universität Magdeburg, Universitätsklinik für Allgemein-, Viszeral- und Gefäßchirurgie, Magdeburg, Germany
  • 3Veterans Affairs Tennessee Valley Healthcare System, Nashville, United States
  • 4Vanderbilt University Medical Center, Division of Gastroenterolgoy, Department of Pediatrics, Nashville, United States
  • 5University of Southern California Keck School of Medicine, Department of Pediatrics, Los Angeles, United States
  • 6Vanderbilt University Medical Center, Department of Cancer Biology, Nashville, United States
  • 7Institut National de la Recherche Agronomique, Unité de Microbiologie UR454, Saint-Genès-Champanelle, France

Einleitung: Während der H. pylori (Hp) Infektion kommt es zu einer Aktivierung des angeborenen Immunsystems & somit zu einer gesteigerten Stickstoffmonoxid (NO) Produktion durch die induzierbare Stickstoffmonoxid-Synthase (iNOS). Wir haben bereits berichtet, dass eine Hp Infektion zu einer Erhöhung von iNOS mRNA & iNOS Protein führt, sowohl in Makrophagen in vitro, als auch in Makrophagen des Magens in vivo.

Ziel: Die Bedeutung der Hp induzierten EGFR Aktivierung für die iNOS gesteuerte NO Produktion in Makrophagen zu bestimmen.

Methodik: RAW 264,7 Zellen wurden mit Hp aktiviert & die EGFR Phosphorylierung wurde mit anti-EGFR PY1068 im Western Blot bestimmt. Nach Infektion mit Hp und Exposition mit AG1478 wurden folgende Messungen durchgeführt: 1) iNOS mRNA (qPCR) 2) iNOS Proteinexpression (Western Blot, Densitometrie) 3) NO Produktion (Griess Test). C57BL/6 WT & EGFR wa5 Mäuse wurden für 2 Monate mit HpSS1 (PMSS1) infiziert, um iNOS mRNA Werte im Magengewebe zu bestimmen.

Ergebnis: In Hp infizierten RAW 264,7 Zellen kommt es zu einer EGFR Phosphorylierung am Tyrosinrest 1068 nach 320 Minuten, AG1478 Behandlung hemmt diesen Effekt. Hp induziert eine 442,3±52,4 fache Erhöhung von iNOS mRNA, welche durch AG1478 um 68,2±8,2% (p<0,01) wieder gesenkt wurde. Densitometrie von iNOS Western Blots zeigte einen 8,34±8,2 fachen Anstieg von iNOS Protein in Hp infizierten Zellen, durch AG1478 wurde dieser Effekt um 75,8±9,2% (p<0,05) gesenkt. NO Produktion in Hp aktivierten Makrophagen wurde von 2,1±1,2 mM zu 38,2±2,8 mM erhöht und durch AG1478 Behandlung um 73,2±7,2% (p<0,001) gesenkt. Aktivierung mit Hp (Lysat) steigerte die NO Produktion von 2,1±0,8 mM auf 17,8±2,3 mM, aber interessanterweise wurde diese nicht durch AG1478 inhibiert. PMSS1 infizierte WT Mäuse zeigten 9,2±2,1 fache Erhöhungen von iNOS mRNA, wobei EGFR wa5 Mäuse nur eine 3,2±1,2 fache Steigerung zeigten (p<0,01, n=5 pro Gruppe).

Schlussfolgerung: Eine Hp Infektion führt in Makrophagen zu einer Phosphorylierung von EGFR am Tyrosinrest 1068, welche eine Erhöhung der iNOS Expression & NO Produktion zur Folge hat. Der EGFR Aktivierung kann somit eine wichtige Rolle in der iNOS gesteuerten Immunantwort während einer Hp Infektion zugeordnet werden.